菌株描述:ATCC2599 為出發(fā)菌株在 attz 位點利用 CrispR/Cas9 技術(shù)插入了tac-mcherry 基
因,mcherry 是組成型表達
插入后基因序列信息:(灰色和黃色底紋是同源臂序列,紅色底紋是 tac-mcherry 序列)
活化方法:
方法 1:用滅菌移液器頭挑取菌液劃線到 LB 無抗平板 37℃過夜,之后挑取單克隆接種到
LB 無抗的液體培養(yǎng)基 37℃活化
方法 2:直接取 10μl 菌液直接轉(zhuǎn)接 LB 液體(注意:無抗性菌株接菌請做培養(yǎng)基對照,以
免菌種污染),也可以添加菌株本身自帶的抗生素抗性進行活化
菌株保存:
取 1ml 過夜培養(yǎng)的菌液加入終濃度 10-15%的甘油混勻(50%甘油一般加 330 μl)
-80℃長期保存
注:-80℃保存菌株避免反復凍融,時間久了會活力不好,一般拿出后不等融化立即挑取少
許冰渣液體接種或者劃線培養(yǎng)。